恩泽康泰-外泌体研究专家
 
 
首页  >  新闻动态  >   公司新闻
恩泽康泰最新合作成果刊登外泌体顶级期刊JEV (IF=11)
作者:    发布时间:
重磅!

   

    由北京恩泽康泰与首都医科大学附属北京友谊医院消化分中心团队合作的研究成果发表在国际外泌体顶级期刊Journal of Extracellular Vesicles(IF=11,生物学1区)。本研究首次报道了早期结肠癌患者血浆外泌体的miRNA谱,研发了高效识别结肠早癌的外泌体液体活检方案,并首次证实了外泌体miRNA相对血浆游离miRNA更适合消化道早癌诊断。

研究详情

血浆小EVs-miRNAs作为早期结肠癌标志物的评估:对比分析血浆total miRNAs

研究目的:系统性的对早期结肠癌特异的血浆sEVs标志物进行筛选及验证。
1、sEVs的特征鉴定
     对超离分离的sEVs进行TEM、NTA和Western Blot的表征分析。另外CC和NC在sEVs RNA浓度、血浆total RNA浓度以及sEVs RNA在经血浆total RNA归一后的百分比方面均无显著差异。

sEVs的TEM(A)、NTA(B)和WB(C)表征
2、通过测序筛选CC患者和NC血浆sEVs中的差异miRNAs
     对15例CC和10例NC血浆sEVs进行miRNA测序及差异miRNA分析,结果显示60个差异表达的miRNA(DEMs)与TCGA数据库有重叠,每个DEM在sEVs和TCGA中有着相似的灵敏度和特异性。60个DEMs对应的靶基因涉及细胞骨架、细胞迁移、ATP结合、生物合成等功能以及癌症相关通路。

A.结肠癌种TCGA数据集和sEVs差异miRNA数据集的韦恩图;B.60个共有DEMs在sEVs中的表达量热图;C.sEVs测序数据中60个DEMs诊断CC的灵敏度和特异性分布;D. TCGA数据中60个DEMs诊断CC的灵敏度和特异性分布
3、结肠癌相关sEVs miRNAs验证标志物筛选及EVs来源验证
     基于上述60个DEMs,根据在循环系统中被报道与肿瘤相关以及被报道在结直肠癌中有功能的原则筛选得到4个候选miRNA标志物:let-7b-3p,miR-150-3p,miR-145-3p,和miR-139-3p。为了进一步证实候选miRNA是EV来源,在RNA提取前进行了蛋白酶K和RNase的消化验证。结果显示sEVs中let-7b-3p,miR-150-3p,miR-145-3p,和miR-139-3p未被降解,然而在血浆中经酶消化后部分被降解了,阳性对照miR-21-5p和miR-30a-5p(已知的RNP相关miRNA)在相同处理下几乎都被降解了。结果表明候选miRNAs在sEVs中受到sEVs膜的保护。

血浆和sEVs在蛋白酶K和RNase A处理后的蛋白考马斯亮蓝染色(A)和RNA的2100检测结果(B,C)以及miRNAs的RT-qPCR定量结果(D-G)
4、sEVs miRNAs候选标志物在早期结肠癌中的验证
     采用RT-qPCR方法在134例样本(58例CC,76例NC)的验证集中验证sEVs来源的let-7b-3p、miR-150-3p、miR-145-3p和miR-139-3p的诊断性能,四个miRNA的AUC分别为0.792、0.686、0.692和0.679。进一步采用逻辑回归模型分析了不同的miRNA panel性能,其中let-7b-3p、miR-145-3p和miR-139-3p的组合AUC可高达0.927。

sEVs来源miRNA panels作为早期CC诊断标志物的AUC性能
5、目的标志物在sEVs和血浆直接检测的诊断性能比较
     sEVs来源miRNA是血浆总miRNA的一部分,为了研究分离sEVs对miRNA标志物检测的必要性,本研究对比分析了sEVs来源miRNA和血浆总miRNA中候选标志物的诊断性能。结果显示相比血浆总miRNA,sEVs来源miRNA有着更高的AUC和诊断潜能。对于多个miRNA panels,分离sEVs后的miRNA标志物对于早期CC患者的鉴别诊断有着非常明显的优势。

miRNA panels在sEVs和血浆total miRNAs中作为早期CC诊断标志物的AUC性能比较


    总结:sEVs来源的miRNA在结直肠癌早期鉴别诊断中具有良好的性能,三个miRNA组合AUC=0.927;sEVs中差异的miRNA在分离sEVs后检测比从血浆直接检测具有更好的诊断性能。


重磅!

     这是首篇由国内企业与合作伙伴通力合作发表在外泌体顶级期刊JEV上的外泌体研究性文章。JEV是国际细胞外囊泡协会的官方杂志,涉及所有与细胞外囊泡(包括外泌体、微泡、凋亡小体)的化学、生物学和/或应用的相关研究数据和信息。今年迎来该杂志的首个影响因子11,JEV对外泌体研究技术和方法有着极其严格的要求,这也说明了恩泽康泰的外泌体研究技术和平台得到了外泌体国际权威杂志的认可,能够为广大客户提供顶级的外泌体研究服务。

中国生物技术网
版权所有@恩泽康泰 Copyrights 2019     京ICP备19033722号-1