恩泽康泰-外泌体研究专家

产品介绍

外泌体是由多泡体与细胞膜融合后，释放到细胞外的，直径介于30-150nm的膜性小囊泡，是细胞间通讯的载体。有关外泌体的分离，不同的分离方法各有利弊，目前并没有单一的最优方法来分离获得纯净的外泌体，因而方法的选择取决于下游的应用及需要解决的科学问题。

国际囊泡协会（ISEV）在“2018年囊泡研究基本实验要求（MISEV2018）”中把细胞外囊泡（含外泌体）的分离方法分为以下4个层面：

1.高回收率，低特异性：除了最大程度收集了EVs，还富集了大量非囊泡杂质。代表方法：PEG沉淀，低分子量过滤，无前处理的超速离心。

2.中等回收率，中等特异性：收集的EVs中包含很多游离蛋白，核糖核蛋白及脂蛋白等。代表方法：排阻色谱，高分子量过滤，尚未优化的超速离心，膜亲和柱。

3.低回收率，高特异性：可以富集到细胞外囊泡的某些亚型，几乎不含有非囊泡组分。代表方法：排阻+超滤，免疫捕获，流式细胞术。

4.高回收率，高特异性：可以富集不同囊泡亚群的同时具备很高的回收率。代表方法：目前不存在，未来可能会有。

其中分子尺寸排阻（SEC）+超滤被列为高纯度的纯化方法，SEC在外泌体或囊泡研究中越来越广泛，在文章中出现的频次也越来越高。

目前恩泽康泰提供超离、SEC+超滤、PEG等外泌体分离服务，以及基于SEC原理的外泌体纯化试剂盒Exosupur。

外泌体纯化试剂盒——Exosupur

以荧光外泌体作为标准品，Exosupur可回收94.87%的荧光外泌体；

能够去除99.44%的血浆游离杂蛋白，如主要的miRNA结合蛋白Ago、血浆杂蛋白HAS在Exosupur中更少；

跟超离及市面常见试剂盒相比，Exosupur的particle数与蛋白含量比值更高，表明Exosupur分离得外泌体纯度更高，杂蛋白含量更低。

Exosupur更适合用于后续的外泌体RNA组学和验证、蛋白质组学及功能学研究。

Exosupur的优势

外泌体鉴定服务

产品介绍

根据国际细胞外囊泡研究协会（ISEV）针对囊泡研究提出的2018最小试验要求（MISEV2018），细胞外囊泡（EVs，含外泌体）鉴定主要分为总体表征和个体表征两部分：

总体表征

蛋白鉴定：应用Western Blot或流式细胞术对EVs的阳性标志物和阴性标志物进行表征。其中包括至少3个阳性（至少包括1个跨膜蛋白和1个细胞溶质蛋白）、1个阴性蛋白质标志物。

个体表征

粒径分析：应用动态光散射(DLS)或纳米颗粒跟踪分析(NTA)方法，对粒径分布进行分析

形态表征：应用透射电子显微镜（TEM）或原子力显微镜（AFM）方法对EVs的形态及粒径进行表征

电镜检测

透射电子显微镜观察法（TEM）是从形态和大小上对外泌体进行鉴定。通过负染的方法，在高倍放大下直接观察单个外泌体的形态结构和大小。

检测仪器：透射电子显微镜（HITACHI，H-7650）

样本要求：BCA浓度300-400ng/μl，体积10μl；避免反复冻融，4℃保存，冰袋运输。

粒径检测

粒径分析是从整体上对外泌体大小的分布情况进行检测，具有准确、快速、重复性好等优点，是对现有外泌体鉴定方法的良好补充。

检测仪器：Particle Metrix（ZetaView）

样本要求： 避免反复冻融，4℃保存，冰袋运输。

Western Blot检测

Western blot是通过抗原抗体特异性结合的原理，检测外泌体标志蛋白，从蛋白质层面对外泌体进行鉴定。常用的外泌体标志蛋白包括CD63、TSG101及Alix等。

检测方法：ECL化学发光，传统胶片曝光或者专用曝光仪器。

样本要求：血浆样本BCA量60ug，＞0.5μg/μl；细胞上清BCA量40μg，＞0.5μg/μl；冰袋运输。

科研服务