外泌体组学研究
送样指导

采集前/中后段晨尿；若不能第一时间处理，于4℃临时保存，不超过8h。

将采集到的尿液在4℃下（室温亦可）以2000g离心20min，去除尿液中的细胞。

采用腰椎穿刺采集；样本一经分离，立即置于冰上或4℃短暂保存，不得超过4h；采样时避免血液污染。

2000g、4℃离心20min，去除细胞及部分碎片，取上清。

胸水/胸腔积液样本一般较黏稠；临床收集后若不能第一时间处理，于4℃临时保存，不得超过4-6h。

将收集到的胸水于4℃、1000g离心10min，收集上清液。

继续于4℃、3000g离心10min，收集上清。

腹水/腹腔积液样本一般较黏稠；临床收集后若不能第一时间处理，于4℃临时保存，不得超过4-6h。

将腹水于4℃、2000g离心20min，去除腹水中的残渣。

取100-200ml生理盐水，通过支气管镜灌洗相应的支气管肺段。

吸取肺泡灌洗液100-200ml，收集到无菌50ml离心管中。

4℃、400g离心10min，收集上清，除去大的杂质、细胞。

4℃、3000g离心15min，收集上清，去除细胞碎片。

用生理盐水灌洗腹腔，取腹腔灌洗液100-200ml，收集到无菌50ml离心管中。

4℃、400g离心10min，收集上清，除去大的杂质、细胞。

4℃、3000g离心15min，收集上清，去除细胞碎片。

患者用清水清洁口腔后，以舒适姿势躺好或坐好，头部向下倾斜，将唾液囤积到口腔，约2-5min。

将囤积在口腔的唾液收集到50ml无菌离心管或30mm培养皿，继续收集至约5ml。

收集过程中将离心管或培养皿置于冰上，整个收集过程不超过60min。

将唾液于4℃、3000g离心15min，去除细胞和细胞碎片。

将上清转入新的10ml离心管，添加蛋白酶抑制剂（Roche：04693116001，1片/50ml），防止蛋白降解。

患者吸入高渗（NaCl 5%）或等渗（NaCl 0.9%）盐水诱导痰液；诱导痰务必于2h内进行后续处理。

加入4倍体积的0.1%二硫苏糖醇DTT，用吸管反复吹打，漩涡器振荡15s，室温摇床孵育15min，直至团块消失、痰液全部均质化。原文说明DTT用于打开黏液中的二硫键以溶解黏液。

加入4倍体积PBS，使用70μm滤膜过滤；滤液于4℃、600g离心10min。

用新离心管收集上清。

用无菌容器收集胆汁。

将胆汁于4℃、3000g离心10min，去除细胞沉渣和碎片。

收集胆汁上清液。

通过关节穿刺将关节液/关节滑液收集到EDTA抗凝管中；若不能第一时间处理，于4℃临时保存。

2700g离心30min。

通过无菌管收集羊水；样本于4℃、500g离心10min去除细胞，用新离心管收集上清。

上清于4℃、3000g离心15min，去除细胞碎片。

取上清过0.22μm滤膜，收集滤液。

对外阴、阴道和宫颈常规清洗消毒后，抽吸子宫积液/宫腔积液，注意去除黏液。

加入1倍体积无菌PBS混匀稀释，于4℃、300g离心15min。

取上清继续于4℃、2500g离心20min，去除子宫内膜组织细胞和细胞碎片。

取上清过0.22μm滤膜，收集滤液。

禁欲3天后，通过手淫从每个受试者中获取样本，在37℃下液化30min。

于4℃、1600g离心10min，去除精子细胞，转移上清至新的离心管中。

于4℃、3200g离心15min，去除细胞碎片，得到上清液（精浆），液氮速冻。

经超声引导穿刺取卵时，收集无血污染的澄清卵泡液至无菌离心管中。

300g离心10min取上清，后接3000g离心10min再取上清。

用0.22μm滤膜过滤并收集上清。

吸取前清洗乳房，乳汁用吸奶泵吸取或手动挤取，样本收集 3 小时内进行处理。

4°C 下 2000g 离心 15min，去除脂肪层。

乙酸调节 pH 至 4.6，调节过程中边加边搅拌防止局部过酸，保持 10min；5000g、4°C 离心 30min，去除酪蛋白。

取上清，0.22μm 滤膜过滤（参考后续注意事项），滤液 -80°C 保存，干冰寄送。

采集到的淋巴液在 4°C、500g 离心 10min，去除沉淀。

取上清，4°C、3000g 离心 20min，收集上清于 -80°C 保存，干冰寄送。

存放于无菌保存管中的器官保存液，以 4°C、300g 离心 10min。

取上清再用 3000g、4°C 离心 10min。

新无菌管收集上清，-80°C 保存，干冰寄送。

通过注射器穿刺抽液采集法或者依靠玻璃体切割机采集法，采集 0.2~0.5 ml 玻璃体液至无菌管中。

玻璃体液样本于 4°C、300g 离心 10min，新离心管收集上清。

上清于 4°C、2000g 离心 20min，以去除细胞碎片。

新的低吸附离心管收集上清，-80°C 保存，干冰运输。

通过穿刺手术获得约 100-200μl 房水样本，经 3000g、4°C 离心 10min，去除细胞和碎片。

新的低吸附离心管收集上清，-80°C 保存，干冰运输。

用镊子取出 Schirmer test 滤纸条，从开口处用小镊子折叠成直角，夹在下眼睑外侧 1/3 处结膜囊内，另一端悬挂在下眼睑外部，嘱受试者轻闭双眼，开始计时 5min。

待滤纸条收集 5min 后取出；若滤纸条湿长提前到达 30mm，则提前取出并结束收集；若 5 分钟后湿长不足 10mm，则适当延迟收集时间，但一般不超过 10min。

取出双眼滤纸条置于无菌 EP 管，记录滤纸条湿长（静置一会，看滤纸条终湿长）及收集时间，并用 5mL PBS 浸泡 30min 以便于洗脱拭纸，置于 4°C。

然后 300g、4°C 离心 10min，取上清；2000g、4°C 离心 10min。

重复收集多次，样本合并于 -80°C 保存，干冰运输。

采用 ACD（枸橼酸钠葡萄糖溶液）抗凝管收集全血，室温 440×g 离心 10min。

转移顶部（上两层）含有血小板的血浆，添加前列腺素 E1（100ng/mL）到血浆中抑制血小板活化，1700g 室温离心 10min。

丢弃三分之二的上清液，用剩余血浆重悬血小板颗粒，即得到 PRP（下面以 PRP 外源激活为例进行介绍）。

PRP 激活：PRP 样品添加含有 CaCl₂（0.1mL、5%）和凝血酶（0.1mL、5%）混合物，在 37°C 水浴中孵育 20 分钟活化血小板；标志物研究可以不额外激活，省略此步。

4°C 条件下 300g 离心 10 分钟取上清，2000g 离心 20 分钟取上清，以去除细胞和碎片；上清过 0.22μm 膜取滤液，-80°C 保存，干冰运输。

适用于：鉴定进行鉴定的外泌体样本建议不冻存，4 度保存、湿冰运输；分离后尽快寄送至我司。

适用于：组学分析进行组学分析的样本建议 -80°C 保存，干冰运输；不建议外泌体样本保存超过 3 个月以上，以免影响检测效果。