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阿哈,是谁在苦恼?没有好用的外泌体WB鉴定抗体! |
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阿哈,是谁在召唤?恩博为您解忧排难! |
大量临床前与临床研究数据证实,MSC 来源外泌体/EV具备组织再生潜力;MSC EV携带 RNA 与蛋白,可介导修复进程,同时兼具抗炎、免疫调节功能,且MSC EV 不会诱发严重免疫排斥反应,适合异体给药。临床试验数据库(ClinicalTrials.gov)数据显示,全球至少已有百余项干细胞来源EV疗法临床试验完成注册,其中大量项目已完成入组或正在招募受试者。随着 MSC-EV 治疗潜力相关数据指数级增长,亟需一套循证、普适的 EV 表征体系,能够判定 EV 来源于 MSC、完整界定 MSC-EV 制剂真实身份特征,建立可预测 MSC-EV 制剂治疗效力(效价)的特征指标与配套检测方案。
🌿 1、MSC外泌体WB鉴定应该怎么做? 🌿
外泌体WB鉴定是其中一项基础且必备的表征。MISEV2023关于外泌体WB鉴定的建议,本文不再赘述,建议大家参考《「教师节献礼」外泌体WB鉴定出师啦!》,简而言之,人源外泌体尽量有3阳(腔内+膜)1阴,大小鼠的WB尽量有2阳1阴。
近日中检院在JEV杂志重磅发表了干细胞外泌体治疗产品质量评价框架,指出:通用EV标志物往往跨细胞类型共享,无法充分说明供者来源、组织来源、细胞类型或基因修饰状态。而这些信息恰恰与EV产品的疗效和安全性密切相关。因此,治疗性干细胞来源EV应建立“通用标志物+来源特异性标志物”的双层身份评价体系。例如,MSC来源EV可进一步考虑CD73、CD105、CD44等阳性特异标志物,以及CD11b、CD14、CD19、CD45、CD79等阴性标志物;PSC来源EV则已有研究提示PODXL、SSEA4等可作为特异性标志物。
🌸 2、MSC外泌体特异性marker蛋白有哪些?🌸
MSC细胞表型鉴定:
那么,MSC EV是否可以同样用这些阳性marker蛋白进行表征呢?
目前有几项研究(详见下面图片),试图找到一组在各类干细胞EV稳定阳性/稳定阴性表达的表面标志物,作为 MSC EV 身份判定的最低标准,以期提升新兴 MSC-EV 治疗领域实验结果的一致性与可重复性。
目前可通过以下技术对MSC EV进行身份表征:
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MSC EV身份鉴定的阳性marker蛋白有:
• 脐带、脂肪、骨髓等来源MSC或iMSC来源EV:CD73、CD105、CD90、CD13、CD29、CD44等;
• ESC和iPSC来源EV:PODXL、SSEA4等
MSC EV身份鉴定阳性marker蛋白筛选原则:
脐带、脂肪、骨髓等来源MSC或iMSC来源EV表达阳性/高阳性率,但其他非MSC来源EV表达阴性/低阳性率。
🍃 3、一盒搞定MSC EV 身份鉴定 🍃
(ExosuperQC® Western Blot Kit for Characterization of MSC-Specific Proteins in Extracellular Vesicle)
提供经MSC EV 样本验证的高特异性兔源CD13、CD73 一抗及配套二抗;同时内置人脐带间充质干细胞(HUMSC)裂解液作为阳性对照,可用于监控实验操作与WB流程的可靠性。本试剂盒专为HUMSC等人源干细胞来源 EV 设计,帮助研究者快速完成MSC EV身份鉴定。
💎 披沙拣金——层层筛选、严格把控抗体特异性:
(1)恩泽康泰ContrExoⓇ高浓度HUMSC外泌体(Cat# CTE-052)、高纯HUMSC外泌体(Cat# CTE-05)作为MSC EV样本,293F外泌体参考品(Cat# CTE-06)作为非MSC外泌体对照,进行第一轮筛选,排除HUMSC EV非特异抗体或有杂带的抗体;
(2)以其他MSC EV进行第二轮实验,验证MSC EV通用性。所述其他MSC EV为:人源DPSC细胞和iMSC细胞培养上清,超滤浓缩后上样ExosupurⓇ排阻柱,收集外泌体馏分进行超滤浓缩,获得的iMSC和DPSC来源EV。
✨ 简单易用——专门针对MSC外泌体设计的特异蛋白WB鉴定试剂盒:
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无需您费时费力挑选抗体了:
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上样量有数据可参考:
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可排除实验操作有无问题:
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一套loading buffer跑所有抗体:
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抗体套餐或单独抗体随心选:
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Demo应用展示:
使用的外泌体详情:
| 外泌体名称 | 恩泽康泰货号 | 分离方法 | 物种来源 |
| 高浓度HuMSC外泌体 |
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| 高纯HuMSC外泌体 |
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| 293F外泌体 |
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| iMSC外泌体 |
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| DPSC外泌体 |
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ExosuperQCⓇ干细胞特异蛋白外泌体WB鉴定试剂盒使用结果:
注:详细操作说明和上样量等,请咨询我们获取说明书进行参考。
🌿 4、MSC外泌体WB鉴定解决方案---通用+特异CP组合 🌿
最后,给大家推荐一个可以无脑入手做MSC外泌体WB鉴定的试剂盒CP:ExosuperQCⓇ外泌体4阳1阴WB鉴定试剂盒 + ExosuperQCⓇ干细胞特异蛋白外泌体 WB鉴定试剂盒-CD13 &CD73,兼顾EV通用标志蛋白检测 和 MSC EV特异性身份鉴定检测。无论您做MSC外泌体临床前科学研究发表文章,还是MSC外泌体工艺开发、成品质控,“墙裂”推荐!
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本活动最终解释权归恩泽康泰所有!
详情见: