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阿哈,是谁在呐喊?外泌体WB一直做不好(无目的条带、非特异杂带等)!
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阿哈,是谁在哭诉?MSC外泌体WB不知道选哪些marker!
😰

阿哈,是谁在苦恼?没有好用的外泌体WB鉴定抗体

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阿哈,是谁在召唤?恩博为您解忧排难!

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大量临床前与临床研究数据证实,MSC 来源外泌体/EV具备组织再生潜力;MSC EV携带 RNA 与蛋白,可介导修复进程,同时兼具抗炎、免疫调节功能,且MSC EV 不会诱发严重免疫排斥反应,适合异体给药。临床试验数据库(ClinicalTrials.gov)数据显示,全球至少已有百余项干细胞来源EV疗法临床试验完成注册,其中大量项目已完成入组或正在招募受试者。随着 MSC-EV 治疗潜力相关数据指数级增长,亟需一套循证、普适的 EV 表征体系,能够判定 EV 来源于 MSC、完整界定 MSC-EV 制剂真实身份特征,建立可预测 MSC-EV 制剂治疗效力(效价)的特征指标与配套检测方案。



🌿 1、MSC外泌体WB鉴定应该怎么做? 🌿


外泌体WB鉴定是其中一项基础且必备的表征。MISEV2023关于外泌体WB鉴定的建议,本文不再赘述,建议大家参考《「教师节献礼」外泌体WB鉴定出师啦!》,简而言之,人源外泌体尽量有3阳(腔内+膜)1阴,大小鼠的WB尽量有2阳1阴。

近日中检院在JEV杂志重磅发表了干细胞外泌体治疗产品质量评价框架,指出:通用EV标志物往往跨细胞类型共享,无法充分说明供者来源、组织来源、细胞类型或基因修饰状态。而这些信息恰恰与EV产品的疗效和安全性密切相关。因此,治疗性干细胞来源EV应建立“通用标志物+来源特异性标志物”的双层身份评价体系。例如,MSC来源EV可进一步考虑CD73、CD105、CD44等阳性特异标志物,以及CD11b、CD14、CD19、CD45、CD79等阴性标志物;PSC来源EV则已有研究提示PODXL、SSEA4等可作为特异性标志物。

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🌸 2、MSC外泌体特异性marker蛋白有哪些?🌸

MSC细胞表型鉴定:

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那么,MSC EV是否可以同样用这些阳性marker蛋白进行表征呢?

目前有几项研究(详见下面图片),试图找到一组在各类干细胞EV稳定阳性/稳定阴性表达的表面标志物,作为 MSC EV 身份判定的最低标准,以期提升新兴 MSC-EV 治疗领域实验结果的一致性与可重复性。

目前可通过以下技术对MSC EV进行身份表征:

通过WB检测MSC EV阳性/阴性表达的表面marker蛋白;
质谱筛选MSC EV特异性蛋白(MSC EV  vs  non-MSC EV);
Beads流式检测MSC EV表面蛋白表达水平;
NanoFCM等检测单颗粒水平MSC EV表面蛋白表达阳性率。
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注:Beads流式或nanoFCM检测MSC EV表面蛋白,可全程监控 MSC EV 生产各阶段样本,助力临床前、最终治疗制剂批次的验证与质量控制。恩泽康泰可提供基于nanoFCM检测MSC EV表面蛋白阳性率服务,详见《从最新的JEV质量评价框架,看外泌体检测如何从“基础表征”走向“产品质控”》。


MSC EV身份鉴定的阳性marker蛋白有:

• 脐带、脂肪、骨髓等来源MSC或iMSC来源EV:CD73、CD105、CD90、CD13、CD29、CD44等;

• ESC和iPSC来源EV:PODXL、SSEA4等


MSC EV身份鉴定阳性marker蛋白筛选原则:

脐带、脂肪、骨髓等来源MSC或iMSC来源EV表达阳性/高阳性率,但其他非MSC来源EV表达阴性/低阳性率。



🍃 3、一盒搞定MSC EV 身份鉴定 🍃

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ExosuperQC 干细胞特征蛋白外泌体WB鉴定试剂盒

(ExosuperQC® Western Blot Kit for Characterization of MSC-Specific Proteins in Extracellular Vesicle)

提供经MSC EV 样本验证的高特异性兔源CD13、CD73 一抗及配套二抗;同时内置人脐带间充质干细胞(HUMSC)裂解液作为阳性对照,可用于监控实验操作与WB流程的可靠性。本试剂盒专为HUMSC等人源干细胞来源 EV 设计,帮助研究者快速完成MSC EV身份鉴定。

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💎 披沙拣金——层层筛选、严格把控抗体特异性:

(1)恩泽康泰ContrExo高浓度HUMSC外泌体(Cat# CTE-052)、高纯HUMSC外泌体(Cat# CTE-05)作为MSC EV样本,293F外泌体参考品(Cat# CTE-06)作为非MSC外泌体对照,进行第一轮筛选,排除HUMSC EV非特异抗体或有杂带的抗体;

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(2)以其他MSC EV进行第二轮实验,验证MSC EV通用性。所述其他MSC EV为:人源DPSC细胞和iMSC细胞培养上清,超滤浓缩后上样ExosupurⓇ排阻柱,收集外泌体馏分进行超滤浓缩,获得的iMSC和DPSC来源EV。

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✨ 简单易用——专门针对MSC外泌体设计的特异蛋白WB鉴定试剂盒:

无需您费时费力挑选抗体了:
本试剂盒中1抗均为兔源,具有与抗原亲和力高、信号更稳定、经过多种MSC外泌体样本验证等优势;配套赠送同样经过多种外泌体样本验证的2抗,2抗您也不用筛选了。
上样量有数据可参考:
试剂盒说明书有不同纯度、不同MSC细胞来源外泌体,检测每种蛋白时外泌体上样量和抗体稀释比例等。您根据自己的外泌体来源和纯度参考我们的demo示例进行上样量和抗体用量调整即可。
可排除实验操作有无问题:
赠送HuMSC细胞裂解液CL,随样本一起做WB,可用于排查操作流程有无问题,CL的建议上样量均可参考说明书示例进行设置。
一套loading buffer跑所有抗体:
所有抗体均使用应用场景更广、更不容易翻车的还原性loading buffer,简化了样本处理的难度;
抗体套餐或单独抗体随心选:
可采购CD13 &CD73抗体套餐,也可采购单个抗体(每个抗体都赠送2抗和阳性细胞裂解液CL)自主DIY!


Demo应用展示:

使用的外泌体详情:

外泌体名称 恩泽康泰货号 分离方法 物种来源
高浓度HuMSC外泌体
CTE-052
切向流过滤TFF
Human
高纯HuMSC外泌体
CTE-05
TFF结合多模式复合层析
293F外泌体
CTE-06
TFF结合多模式复合层析
iMSC外泌体
/
Exosupur排阻超滤
DPSC外泌体
/
Exosupur排阻超滤

ExosuperQC干细胞特异蛋白外泌体WB鉴定试剂盒使用结果:

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注:详细操作说明和上样量等,请咨询我们获取说明书进行参考。




🌿 4、MSC外泌体WB鉴定解决方案---通用+特异CP组合 🌿

最后,给大家推荐一个可以无脑入手做MSC外泌体WB鉴定的试剂盒CP:ExosuperQC外泌体4阳1阴WB鉴定试剂盒 ExosuperQC干细胞特异蛋白外泌体 WB鉴定试剂盒-CD13 &CD73,兼顾EV通用标志蛋白检测 和 MSC EV特异性身份鉴定检测。无论您做MSC外泌体临床前科学研究发表文章,还是MSC外泌体工艺开发、成品质控,“墙裂”推荐!

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🎉 5、9周年——买新品送好礼、限量0元试用 🎉

🎁买新品送好礼:

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🔖 0元试用:

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转发本篇微信至微信朋友圈,并配文“丰富的外泌体研究产品,涵盖外泌体现货、分离纯化、细胞培养、示踪染色、工程化改造和外泌体表征试剂盒,200+文献引用,9周年特惠,0元试用大放送!”,集赞50!
发送上述朋友圈集赞50图片,提供给恩博“echo-evs”审核。
审核通过后3个工作日内安排发送。
活动时间:2026年6月1日 - 2026年7月15日

要求:每个课题组限领取1种试用装产品,须在2个月内提交试用反馈结果。每个单品仅限前10名


本活动最终解释权归恩泽康泰所有!

详情见:

历9弥新·童趣6月|外泌体专属9周年惊喜



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关于恩泽康泰
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北京恩泽康泰生物科技有限公司成立于 2017 年,坐落于被誉为“中国药谷”的北京大兴生物医药产业基地,是致力于外泌体技术开发与临床转化的创新型高科技公司。恩泽康泰将十余年的外泌体基础研究与分子生物学、细胞生物学及生物信息学相结合,建立了具有自主知识产权的三大外泌体研究与应用平台:外泌体组学平台 Exoomics®—面对研究型医院及科研机构提供外泌体产品 / 试剂盒及外泌体科学研究整体解决方案;工程化外泌体平台 Echosome®—面对生物医药企业提供工程化外泌体载体设计开发、药物装载、靶向改造等 CRO服务;外泌体 CMC 平台 EchoPharm®—面对生物医药企业提供工程化外泌体的CDMO服务及原料生产。 公司成立以来累计获得多轮数亿元融资,现已建成超 3000 平米的外泌体 GMP 生产车间,并与国内外上千家医院、科研院校及生物企业建立合作,合作发表论文300+篇,处理不同类型的样本5万+例,申报国内外发明专利50+件,获有“博士后科研工作站”、“高新技术企业”、“中关村金种子企业”、北京市知识产权试点单位”等荣誉。


公司致力于通过提供系统的外泌体研究与应用解决方案,赋能临床科研,加速产业转化,并通过持续的创新和严格的质量要求,让外泌体科技推动医学发展,造福美好生活!




本文由 Echo Biotech 恩泽康泰媒体中心发布。内容仅供科研与行业交流参考。