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Exosome Product Reagents
外泌体示踪实验是一种用于追踪外泌体在生物体内或体外环境中的行为、分布和命运的实验技术，是外泌体功能机制研究以及工程化外泌体研究的必备实验。 FluoExo®外泌体示踪染色试剂盒，包含了示踪所需的荧光染料、缓冲液和袖珍柱，能够帮助用户快速、高效、高质量地完成外泌体荧光标记实验。
生物组织在红光和近红外区域的自发荧光较弱，因此红色或近红外染料更适合外泌体的体内示踪实验。本试剂盒中的荧光染料为带有长脂肪族尾巴的亲脂性荧光染料，可以稳定地整合到外泌体膜脂质区并发出红色荧光，兔红细胞中标记的本染料半衰期大于100天，具有强稳定性，有利于长期体内追踪研究。此外，也可用本试剂盒标记外泌体进行体外示踪。
本试剂盒中稀释缓冲液是对哺乳动物细胞具有等渗性，不含洗涤剂或有机溶剂，旨在于染料标记步骤中维持外泌体活性，同时最大程度地提高染料的溶解度和染色效率。
袖珍柱用于以快速、有效去除外泌体标记过程的游离荧光，获得纯化的荧光标记外泌体，即可进行外泌体示踪研究。
| 产品名称 | 货号 | 规格 | 用途 |
| FluoExo®外泌体示踪染色试剂盒-红色 | FE-02-01 | 1T | 可进行1次外泌体染色实验，单次最大处理100μl外泌体（建议外泌体浓度建议高于 1E+11 particles/ml或0.5-1μg/μl） |
| FE-02-02 | 5T | 可进行5次外泌体染色实验，最多处理100μl*5=500μl外泌体（建议外泌体浓度建议高于 1E+11 particles/ml或0.5-1μg/μl） |
帮助用户快速、高效、高质量地完成外泌体荧光标记实验，并高效去除游离荧光染料，以便于进行体内和体外外泌体示踪实验。
1、操作便捷，仅需2次孵育+1次纯化即可完成外泌体染色。
2、高效去除游离染料：试剂盒涵盖了去除游离荧光染料的袖珍柱，游离染料去除效果好(>90-98%）。
以不同浓度染料（2µg/ml-200µg/ml）分别上样100µl到袖珍柱中，收集流出液，酶标仪检测染料原液和流出液的荧光值，计算染料去除率，如上图所示。可见，染料浓度在10µg/ml以上时，袖珍柱的游离染料去除率稳定在98-99%以上。
3、外泌体回收率高：试剂盒涵盖了去除游离荧光染料的袖珍柱，回收率高约50%左右。
分别使用5µg/ml和25µg/ml的亲脂性荧光染料标记293F外泌体（Cat# CTE-06）后，上样100µl到Exosupur®袖珍柱，收集流出液，通过纳米流式测定颗粒数，计算颗粒回收率，将袖珍柱再生后继续重复几次实验，如上图所示。可见，不管使用低浓度还是中高浓度荧光染料标记的外泌体，使用袖珍柱进行几次重复实验，颗粒回收率相对较稳定，约在50-60%以上。
请注意：浓度越低回收率越低，建议外泌体浓度高于 1E+11 particles/ml。
按照上述操作对货架293F外泌体CTE-06进行红色荧光标记，加入受体细胞中孵育24h（建议荧光标记外泌体颗粒数与接种细胞比例大于5000：1），受体细胞的细胞膜和细胞核分别用绿色细胞膜染色剂和 Hoechst 标记，激光共聚焦显微镜扫描结果表明：标记的外泌体 (红色) 被受体细胞摄取。
1、 制备好的荧光标记外泌体终产物可以保存多久？
建议尽快使用，4℃保存不超过48h。
2、 可以不去除游离染料吗？
建议按照上述步骤进行去除，以避免游离染料对后期实验的干扰和假阳性结果。
3、 染料标记、纯化会导致外泌体损失吗？
会损失，一般回收率约30%-50%以上，浓度越低损失越大。因此建议至少取 2 倍于细胞共孵育实验所需外泌体剂量进行染料标记实验。
4、 体外示踪实验，细胞培养时使用正常胎牛血清还是无外泌体血清？
建议使用无外泌体血清（恩泽康泰货号EDFBS50），以提升细胞对染料标记外泌体的摄取效率。
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