关于外泌体纯化方法，国际细胞外囊泡协会（ISEV）的最小实验要求（MISEV2023）中根据不同的原理进行外泌体分离时，每种方法均有优缺点：

分子尺寸排阻色谱法SEC在诸多分离方法中一骑绝尘，因其优良的性能脱颖而出，获得广大EVs领域专家的青睐，在EVs专刊JEV中的研究占比日益提高。
恩泽康泰开发的基于SEC原理的外泌体分离纯化专利产品——Exosupur^®试剂盒，自推出以来经受了市场和EVs领域专家的检验，在操作简便性、性能、稳定性和性价比上获得一致好评。

1. 可兼容细胞上清、尿液等不同样本类型；

2. 可用于不同样本的高通量测序、质谱等组学研究，以及下游的PCR、WB、WLISA验证等，纯度更高，杂质干扰更少，定量更准确；

3. 可用于细胞、动物的功能机制研究，不影响外泌体性质和活性、不引入聚集和其他杂质等影响；

4. 可用于工程化外泌体改造后再次纯化等研究；

5. 可用于纯化相关的方法学开发中作为对照方法使用。

1. 操作简便：无需特殊设备，柱平衡、上样、外泌体收集、外泌体浓缩四步操作，从上样到分离完成仅需30-60min。升级后的产品配套柱平衡或清洗的适配器，让操作更简便，解放双手；

2. 性能优越：对于细胞上清样本可回收最高达95%，杂蛋白去除率99%以上；

3. 稳定性高：只回收固定尺寸范围的外泌体，产物粒径范围窄；实验受外界因素波动的影响比较小；不引入其他的物理化学因素，可以保持完整的外泌体形态和功能；

4. 性价比高：可对排阻柱进行清洗再生，重复5次使用，可处理的样本量大；

5. 质量可靠：Exosupur^®系列sEV纯化试剂盒高效便捷，已辅助客户发文100篇+，经受了行业专家的检验，获得北京市新技术新产品认定。

Exosupur^®分离的细胞上清小细胞外囊泡sEV TEM电镜、WB和nanoFCM粒径表征。

针对细胞上清样本，Exosupur^®最高可回收95%的外泌体，杂蛋白去除率99%以上。下左图为1ml排阻柱(ES914、ES911)分离1mL浓缩细胞上清的效果，下右图为3ml排阻柱(ES933)分离3mL浓缩细胞上清的效果，下第二排为10ml排阻柱上样浓缩的10ml细胞上清的效果。高纯度外泌体更有利于RNA组学、蛋白组学及细胞功能学和在体实验研究。

Protein K和RNase A双酶消化进一步证实了Exosupur^®得到的RNA更多的是来源于囊泡，而囊泡外的游离RNA检测值更低。

Exosupur^®分离的外泌体进行蛋白质组研究时，可检测到丰富的囊泡特异的标志物蛋白，表明外泌体纯度高，可以更多检测外泌体来源的蛋白；可检测到比较多的蛋白数量，有利于不同样本之间的差异分析；与已发表文章、数据库具有较多overlap，表明数据可靠，能够准确的对外泌体蛋白进行研究。

对比不同的SEC分离方法：经过Exosupur^®试剂盒收集的馏分，具有最高的荧光强度（A)和最低的蛋白质浓度（B和C），表明Exosupur^®具有最有效的EVs回收率和最低的游离蛋白质污染。

Q : Exosupur^®外泌体纯化试剂盒能不能配套类似塑料试管架子，方便使用？

A : 我们有配套的排阻柱支架（ES914S和ES933S），需要单独购买。支架链接：Exosupur^® 排阻柱伴侣-支架&适配器配件-恩泽康泰




Q : Exosupur^®外泌体纯化试剂盒每次多倍柱体积PBS或清洗液冲洗，能不能配套有个缓冲器，不用反复添加？

A : 我们有配套的适配器（ES91A和ES93A），需要单独购买。适配器链接：Exosupur^® 排阻柱伴侣-支架&适配器配件-恩泽康泰

 

Q : 适配器跟排阻柱无法严丝合缝，存在漏液？

A : 调整一下适配器的方向，适配器插的稍微紧一点，正常现象不影响使用。

 

Q：该试剂盒分离外泌体需要自备的内容有哪些？

A：1）无菌PBS溶液(须用0.22μm滤膜过滤，建议新鲜配置或采购已过膜的PBS，4°C冰箱保存的PBS溶液需先平衡至室温)；

2）20%无水乙醇(须超声条件脱气20min或配置好后静置过夜)；

3）超滤管(截留分子量100kD)；

4）收集管(1.5mL EP管和15mL离心管)；

5）样品(上样前需平衡到室温)。

 

Q：样本收集完了，颜色还在中间，是否有问题？

A：按照操作说明来做，就没问题，一般是颜色滞后，因为颜色都是小分子成分，会靠后出来，外泌体会先流出，故不能以颜色作为外泌体收集的判断。

 

Q：用完了是直接用封闭液冲洗，还是2倍柱体积PBS冲了再用1倍柱体积封闭液冲？

A：如果本次接着用就不用封闭液清洗；如果本次不用了，需保存起来下次用，那么本次就用PBS冲洗后再封闭液冲洗。

 

Q：分离后的外泌体如何保存？
A：外泌体保存问题跟分离方法无关，是由其本身特性决定的，如果条件允许最好使用新鲜的外泌体进行实验，冻存的外泌体容易产生团聚并出现沉淀。实际研究中，外泌体功能实验往往需要大量的外泌体不得不分批提取保存时可-80℃保存；但做biomarker研究时，如RNA组学等，提取外泌体后需尽快完成RNA提取等后续实验。

Q：Exosupur®可以分离细菌来源外泌体吗？

A: 可以分离细菌培养上清来源外泌体，操作教程如下：







ES914分离幽门螺杆菌外膜囊泡OMV引用文献：Wei S, Li X, Wang J, et al. Outer Membrane Vesicles Secreted by Helicobacter pylori Transmitting Gastric Pathogenic Virulence Factors. ACS Omega. 2021;7(1):240-258. 

Q：Exosupur®可以分离植物来源外泌体吗？

A：可以，可以参考：https://mp.weixin.qq.com/s/uZquvHdPzGLnaHpxe907Tg




Q：Exosupur®可以分离牛奶来源外泌体吗？

A：可以，可以参考：https://mp.weixin.qq.com/s/-PiBtUqg2wOcozeclJhhUw

目前Exosupur®排阻试剂盒已经有100+ SCI文献引用，可放心选购。

1、Li X, Cui J, Ding Z, et al. Klebsiella pneumoniae-derived extracellular vesicles impair endothelial function by inhibiting SIRT1. Cell Commun Signal. 2025;23(1):21.   IF=8.9 

文献下载链接：https://biosignaling.biomedcentral.com/articles/10.1186/s12964-024-02002-0

2、Wang C, Zhou X, Bu T, et al. Engineered extracellular vesicles as nanosponges for lysosomal degradation of PCSK9. Mol Ther. Published online November 26, 2024. doi:10.1016/j.ymthe.2024.11.034   IF=12.0

文献下载链接：https://drive.weixin.qq.com/s?k=ADwAeQcoABA5icrKY4

3、Liu L, Chen S, Liang S, Liang Z. The expression profile of brain-derived exosomal miRNAs reveals the key molecules responsible for spontaneous motor function recovery in a rat model with permanent middle cerebral artery occlusion. Mamm Genome. 2024;35(3):362-376.

文献下载链接：https://drive.weixin.qq.com/s?k=ADwAeQcoABASeS5Dil

4、Chen R, Kang Z, Li W, et al. Extracellular vesicle surface display of αPD-L1 and αCD3 antibodies via engineered late domain-based scaffold to activate T-cell anti-tumor immunity. J Extracell Vesicles. 2024;13(7):e12490.  IF=14.5

文献下载链接：https://isevjournals.onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1002/jev2.12490