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时光荏苒，恩博再次跟大家分享讨论外泌体WB鉴定，恍然3年已过。还记得恩泽康泰火爆全网的外泌体WB鉴定研究指南吗？
从初探到深耕，外泌体研究的每一段旅程，恩博都愿与您温暖相伴、坚定同行，以专业之力，共探生命微观世界的更多可能！
首先，我们来回顾一下MISEV中关于外泌体WB鉴定的建议：
早在MISEV2014中就提出了3阳1阴的要求，至少3种阳性蛋白质标记，包括至少一种跨膜/脂质结合蛋白，一种胞质蛋白；和至少1种阴性蛋白质标记；
MISEV2018在此基础上引入了五分类框架；MISEV2023则是沿用并更新了五分类框架，并提供了每种类别对应的常见marker蛋白，第1类和第2类为胞外囊泡EVs特征性膜蛋白和溶质蛋白，比如说CD9/CD63/CD81和Alix/TSG101/HSP70；
第3类是与EV共分离的污染蛋白，比如血浆中污染蛋白:脂蛋白、白蛋白等;第4类提供了关于EVs可能的细胞内起源的额外信息，可能存在于某些EVs亚型中，但一般内质网蛋白Calnexin、高尔基体蛋白GM130在WB表征时可作为阴性蛋白；
第5类蛋白质在释放后可能与EVs进行结合，是EVs“蛋白冠”的一部分；
第3类和第4类通常属于EVs阴性marker蛋白，第4类中线粒体蛋白可能富含于某些EVs亚群中，这类EVs亚群通常被称为MitoEVs。详见《MISEV 2023解读》专辑。
总之，人源外泌体尽量做3阳1阴，大小鼠的WB尽量有2阳1阴。
您是不是想说，上述理论知晓了，还是做不好WB：
WB步骤较多，包含多个影响实验结果因素，如 ：蛋白样品的提取与处理，SDS-PAGE 浓度对蛋白分离效果，转膜条件和一抗抗体选取/特异性和孵育条件等。
1) 到底做几个蛋白的WB检测合适？
2) 外泌体样本在进行WB检测前要裂解吗?如何裂解？
3) 怎么能确定所用抗体是适合外泌体样本(通常浓度低，存在糖基化等修饰)的高质量抗体？难道要根据文献一一采购回来，再一一验证？
4) 每种蛋白WB检测时，上多少量外泌体比较合适？
外泌体WB鉴定解决方案---
优中选优，试剂上新，解您所忧
ExosuperQCTM外泌体WB鉴定试剂盒，针对您的上述问题，逐一进行击破！适用于人源EVs WB检测，涵盖 293F、HuMSC 等细胞来源 EVs，以及血浆 EVs、组织来源 EVs 等多种样本类型，助力研究者高效完成 EVs WB鉴定。
1) 选几个蛋白：不同细胞、不同体液、不同分离方法得到的外泌体，其标志性蛋白表达水平不同，外泌体异质性极强，首先建议尽可能多选一些阳性marker蛋白进行WB检测，直接做4阳1阴！
2) 外泌体要不要裂解：本试剂盒说明书中提供了外泌体样本上样前详细操作教程，不推荐先对外泌体进行裂解，会稀释样本浓度。
3) 无需您费时费力挑选抗体了：本试剂盒中1抗均为兔源，具有与抗原亲和力高、信号更稳定、经过多种外泌体样本验证等优势；配套赠送同样经过多种外泌体样本验证的2抗，2抗您也不用筛选了。
4) 上样量问题：试剂盒说明书中提供不同纯度、不同细胞来源外泌体，检测每种蛋白时外泌体上样量和抗体稀释比例等。您根据自己的外泌体纯度参考我们的demo示例进行上样量和抗体用量调整即可。
5) 除了您遇到的上述问题，我们还为您做了以下考虑：
如何排除实验操作问题：赠送阳性细胞裂解液CL，随样本一起做WB，可用于排查操作流程有无问题，CL的建议上样量均可参考说明书示例进行设置；
loading buffer使用一致性：所有抗体均使用相同的还原性loading buffer即可，简化了样本处理的难度；除了选择4阳1阴套餐外，您也可以采购单个抗体(每个抗体都赠送2抗和阳性细胞裂解液CL)自主DIY！
Demo应用展示：
采用2种恩泽康泰ContrExo® 产品：293F外泌体标准品（Cat# CTE-062，密度梯度离心分离，极高纯度）和高浓度HuMSC外泌体（Cat# CTE-052，切向流过滤TFF分离），和试剂盒内赠送的细胞裂解液CL，测试ExosuperQCTM外泌体WB鉴定试剂盒的性能。结果显示2种外泌体均有不错的外泌体WB鉴定结果，4阳1阴。（详细上样量、抗体稀释比例此处不再展示，可查看说明书）
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技术支持：service@echobiotech.com；市场合作：marketing@echobiotech.com
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