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工程化外泌体

Multi-omics Studies of Etracellular Vesicles

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项目方案
蛋白内载技术路线
内载eGFP蛋白
常规eGFP过表达质粒转染母细胞后可以少量进入到外泌体中,但仍然主要存在于细胞中,外泌体中的表达量是细胞的1/2。用我们的内载体系,eGFP蛋白主要富集到外泌体中,细胞中存留的量较少,外泌体中的表达量是细胞的3.5倍。因此利用我们的内载体系可以在原有基础上提高7倍的外泌体富集。
内载eGFP蛋白
内载荧光素酶蛋白
内载的荧光素酶蛋白Nanoluc可以实现目的蛋白在外泌体中的分选,并且保持其正常的生物学功能;此外,当EV膜完整时,蛋白酶K无法消化荧光素酶;EV裂解后,腔内释放出来的荧光素酶被蛋白酶K消化,无法与底物反应。证实了Nanoluc蛋白确实表达在外泌体胞内,而非以游离的形式或展示在外泌体膜外。
内载荧光素酶Nanoluc蛋白
内载RNA结合蛋白
内载的RNA结合蛋白L7Ae更多富集至外泌体中。利用L7Ae的分拣作用实现拣目的mRNA在外泌体中的有效装载,证明内载的L7Ae蛋白是有功能活性的。
内载RNA结合蛋白L7Ae
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